[00064159]山羊胚胎体外生产技术体系的建立和应用

技术投资分析： 一、简要技术说明 　　（一）课题来源与背景 本课题为2005年天津市科技攻关培育项目，项目编号为05YFGPNC02100，资助经费20.0万元。 （二）技术原理及性能指标 　　1、山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养 　　（1）山羊卵巢卵母细胞培养液：TCM-199+0.24g/100ml Hepes+0.22g/100ml NaHCO3+0.0112g/100ml丙酮酸钠+0.06g/100ml青霉素+0.01g/100ml链霉素+0.00186g/100ml EDTA +20μg/ml HCG+10%FCS+1μg/ml 17β-雌二醇； 　　（2）成熟培养液微滴体积：50μl（10～15枚卵母细胞）； 　　（3）成熟培养条件：39.0oC，5%CO2，饱和湿度； 　　（4）成熟培养时间：26h。 　　2、成熟卵母细胞的体外受精 　　（1）受精液：TALP液+6mg/ml BSA+1mg/ml葡萄糖+2.5mM咖啡因+80μg/ml肝素钠 　　（2）成熟培养条件：39.0oC，5%CO2，饱和湿度； 　　（3）受精时间：18～20h。 　　3、早期胚胎培养 　　（1）培养液：60% TALP液+40% 体外成熟培养基础液+5%GS； 　　（2）培养液微滴体积：25μl（10～15枚胚胎）； 　　（3）成熟培养条件：39.0oC，5%CO2，饱和湿度； 　　（4）与输卵管上皮细胞共培养。 　　4、技术指标 　　山羊卵巢卵母细胞体外成熟率达84.8%；体外成熟卵母细胞的体外受精率达80.3%；受精卵的囊胚发育率达52.1%；早期胚胎超低温冷冻保存存活率达85.3%；体外生产胚胎移植妊娠率达50.0%。 （三）技术的创造性与先进性 　　1、项目就培养微滴的体积对卵巢卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外发育的影响进行了研究，对卵母细胞和早期胚胎的数量以及微滴体积进行严格的控制，使卵母细胞的成熟率和受精卵的卵裂率以及囊胚发育率都有明显的提高。 　　2、将受精基础液与常规早期胚胎培养液按6：4的比例混合作为早期胚胎培养液，减轻受精卵由受精液转入早期胚胎培养液（一般为TCM-199）时对受精卵细胞造成的应激，早期胚胎的卵裂率明显得到提高。 二、应用情况及存在问题 　　山羊胚胎体外生产技术体系的建立可使屠宰动物卵巢上的雌性配子得到进一步利用，可生产大量廉价质优的胚胎，为山羊胚胎移植技术的大面积推广应用创造了必要的条件，因此其经济效益和社会效益是难以估量的。另外，山羊胚胎体外生产技术体系的建立还有利于更高级山羊胚胎生物工程技术的开展，对其他动物如牛胚胎的体外生产有明显的推动作用。由于屠宰羊品种杂，遗传性能无法知晓，生产的早期胚胎后代的性能难以保证；另外胚胎移植的成本较高，成功率还有待提高，因此体外生产的胚胎市场并不乐观。 技术的应用领域前景分析： 技术的成熟程度，实用范围和安全性 　　该技术在前人研究的基础上进行了创新和改进，获得稳定高效的效果，达到了国内先进水平，并在生产上得到了一定的应用。本技术不仅适用于山羊胚胎的体外生产，而且对牛、绵羊、猪等其它动物的胚胎体外生产技术提供了新的思路和实验依据。该技术体系在天津农学院现代动物生殖技术研究室建立并进行了应用，但由于胚胎体外生产技术的影响因素众多，是否完全适合于其它条件或实验室，还有待于进一步研究。 效益分析： 随着应用范围的扩大，效用辐射面扩大，必定产生良好经济效益。 厂房条件建议： 无 备注： 无