[00004579]一种含有D型氨基酸的双羰基还原酶的突变体的制备方法
联系人： 张甜
所在地：江苏 南京市
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技术详细介绍
本发明公开了一种制备含D型赖氨酸的蛋白质和多肽的方法：在表达性质粒的特定酶切多克隆位点引入了目的蛋白的表达基因，并且将所述表达基因的目的位点突变成为TAG密码子；在该表达性质粒的另一个特定酶切多克隆位点引入ph氨酰tRNA合成酶的序列，得到重组质粒；制备pAC-ph△-AK3质粒；由pAC-ph△-AK3质粒和重组质粒共转染到宿主中，得到表达系统；在培养基中添加D型赖氨酸，诱导上述表达系统表达目的蛋白，纯化得到目的蛋白。利用来源于Pyrococcushorikoshii的赖氨酰tRNA合成酶、抑制型tRNA分子对对D型赖氨酸能专一选择琥珀密码子TAG的特性在双羰基还原酶中定点引入D型赖氨酸，引入效率接近100%，具有广泛的应用价值。
