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[00024147]耐热菌的QC-PCR快速定量检测方法

交易价格: 面议

所属行业: 基础化学

类型: 非专利

技术成熟度: 正在研发

交易方式: 完全转让

联系人: 董维权

所在地:陕西 西安市

服务承诺
产权明晰
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
如实描述

技术详细介绍

  


  一、发明创造简介


  中国苹果浓缩汁生产量及出口量均居世界第一,然而苹果浓缩汁中耐热菌含量常常超标,影响苹果浓缩汁质量安全,耐热菌检测是控制苹果浓缩汁质量安全的必备技术,目前通用方法是传统的细菌平皿培养记数法,检测周期长(4-5d),检测结果不能及时有效的反馈生产线以控制产品质量。本发明公开了一种QC-PCR(竞争定量PCR)快速定量检测耐热菌的方法,其技术路线是:用针筒式滤器过滤被检样品,捕集耐热菌,将滤模上捕集的耐热菌转入1.5mL的Eppendorf离心管中,采用氯化苄法提取耐热菌DNA,用本方法设计的引物1、引物2、引物3与提取的耐热菌DNA(目标模板)和特制的竞争模板进行PCR共扩增(同时设阳性和阴性对照),再经凝胶电泳检测,进行耐热菌的定量或定性判断。本发明可在10h内实现被检样品中有(≧1CFU/mL)或无(<1CFU/ mL)耐热菌的快速定性检测。也可不经预增菌环节,在4-5h内实现快速定量检测,最低检测限为5×102个目标模板/反应体系,或5×103-5×104个耐热菌/反应体系样品。此方法比传统的4-5d时间大大缩短。


  二、创新点


  1.成功设计了耐热菌DNA特异扩增引物和竞争模板引物。


  2.首次建立了耐热菌的QC-PCR(竞争定量PCR)快速定量检测方法,比传统方法的检测时间大大缩短。


  三、发明的应用价值和市场前景


  本发明主要应用于浓缩苹果汁中耐热菌的快速检测,也适用于其他果汁或其他食品中耐热菌的快速检测。仅果汁厂,我国目前就有近100家,年生产苹果浓缩汁50多万吨,耐热菌常常超标,为果汁厂必检项目。本发明能在4-10h内实现耐热菌的快速定性及定量检测,检测结果可及时反馈生产线,以有效控制果汁质量安全,具有很高的应用价值和市场前景。


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