[00024126]内含子小干扰RNA的表达载体和构建方法及其应用
联系人： 董维权
所在地：陕西 西安市
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技术详细介绍
一、发明创造简介
将内含子小干扰RNA的表达元件插入一个6·5kb的腺病毒E1穿梭载体，在多克隆位点的5'端存在启动子及用于插入一个报告基因以及内含子序列的多克隆位点。内含子序列中含有用于插入至少一个小干扰RNA片段的酶切位点，将内含子小干扰RNA的表达元件序列用重叠聚合酶链式反应的方法克隆入报告基因序列中。最终通过内含子的剪辑产生一个具有功能的报告基因及siRNA片段。此载体可以用于人类疾病基因治疗及基因功能研究。
二、创新点
1、将携带siRNA片段的内含子元件插入绿色荧光蛋白序列中，只有当内含子成功剪切后，内含子元件两侧不完整的绿色荧光蛋白序列才可拼接成完整的绿色荧光蛋白mRNA，从而导致绿色荧光蛋白的表达。在荧光显微镜下根据报告基因的表达，可以判断内含子的剪切成功，同时也表明小干扰RNA的成功产生。
2、与Pol3启动子相比u，利用Pol2启动子表达siRNA，不仅可以提高siRNA的表达效率，同时还可以实施组织特异性的表达siRNA。
3、实现了在同一载体中利用同一启动子同时表达多个siRNA片段。
4、此表达元件可以插入到腺病毒载体或面病毒载体或逆转录病毒载体或腺病毒相关载体中，或单独使用费病毒载体，使其在基因治疗方面具有重要的应用前景。
三、发明的应用价值和市场前景
内含子小干扰RNA的表达载体载体在制备治疗肿瘤药物中的用途。
