[00013962]一种抗鸡传染性法氏囊病的重组蛋白亚单位疫苗

　　本发明提供了一种抗鸡传染性法氏囊病（IBD）的亚单位疫苗（专利号201310323802.1），该疫苗是具有较高免疫原性的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白（flagellin）和传染性法氏囊病病毒（VP2）的融合蛋白。上述flagellin+VP2融合蛋白，是利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，构建含有flagellin+VP2基因的重组杆状病毒来表达的。通过上述系统获得重组杆状病毒的周期短，且表达的flagellin+VP2融合蛋白具有较高的免疫保护力。

　　本发明还进一步提供所述 flagellin+VP2 融合蛋白的制备方法，其包括以下步 骤 ： 人工合成编码所述融合蛋白的基因，连接到 pFastBac-HA 质粒，得到重组 载 体 pFastBacHA-flagellin+VP2，转 化 E.coliDH10Bac 感 受 态 细 胞，然 后 利 用 其 含 有细菌 Tn7 转座系统，将该基因转座至杆状病毒穿梭载体 bacmid 中，得到重组质粒 Bacmid-flagellin+VP2，将其转染昆虫 Sf9 细胞，获得重组杆状病毒，并以昆虫 Sf9 细胞为 寄主细胞培养病毒，采用 Ni-NAT 亲和层析法纯化带有 His 标签的目的蛋白。 本发明提供的 flagellin+VP2 融合蛋白中的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白（flagellin） 作为 TLR5 的识别受体，可诱导产生天然免疫应答。已有多个研究表明，鞭毛蛋白不仅是产 生天然免疫应答的诱导剂，而且有助于诱导获得性免疫应答。本发明提供的融合蛋白中的 VP2 是 IBDV 的主要结构蛋白之一，占病毒总蛋白的 51%。且 VP2 具有血清型特异性、含有能 诱导中和抗体的构象依赖性抗原决定簇，是 IBDV 的保护性抗原，其诱导的中和抗体能保护 宿主不受 IBDV 的感染。可见，本发明提供的融合蛋白，鞭毛蛋白作为佐剂增强了 VP2 蛋白 的免疫应答，具有更好的保护作用。

　　本发明是将 VP2 基因串联到鞭毛蛋白基因的 3’端，通过真核表达系统中 Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统将鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白与传染性法氏囊病病毒 VP2 蛋 白进行融合表达，表达融合蛋白的周期短，其表达产物具有与天然产物相似的理化和生物 学特性，能对蛋白质进行正确的翻译后加工修饰，表达稳定，而且表达产量高，且该融合蛋 白具有良好的免疫原性，对鸡进行超强毒攻击后有较好的免疫保护力。本发明的鞭毛蛋白 是经过改造后的鞭毛蛋白，其中去掉了鞭毛蛋白毒力的部分，消除了鞭毛蛋白毒力的影响， 因此通过本发明提供的表达系统能获得没有毒副作用的且具有免疫学活性的表达产物，对鸡传染性法氏囊病新型疫苗的开发具有重要的意义。