[00013960]一种植物乳杆菌的冻干工艺

　　本发明一种植物乳杆菌的冻干工艺（专利号201110103701.4），属于微生物制剂制备工艺。一种植物乳杆菌的冻干工艺，工艺参数为：冻干保护剂pH为7.0～7.5，菌泥与保护剂平衡时间为20～40分钟，-80℃条件下预冻2.0～2.5小时，采用磷酸缓冲液配制保护剂，冻干存活率可达90％以上，活菌数可达4.0×1010cfu/g以上，与常规方法相比，显著提高了植物乳杆菌冻干存活率。

　　本发明提供的冻干工艺基于保护剂 pH，菌泥与保护剂平衡时间，预冻时间等几个 因子来选择最适合植物乳杆菌的冻干工艺产生。对比试验发现本发明所提高的工艺，能够 明显提高植物乳杆菌的冻干存活率。

　　如实施例 1 所示，其它条件相同的情况下，保护剂的 pH 值在 7.0 ～ 7.5 之间，比其 它 pH 值范围的冻干工艺的冻干存活率高，这主要是由于 ：在冻干前，乳酸菌菌体细胞存在 着外部 pH 值和内部 pH 值，两者之差为 pH 值梯度 (ΔpH)，此值是质子移动的动力 (pmf)，可 以作为横跨膜运输过程的能量来源，而冻干会造成 pH 值梯度 (ΔpH) 的破坏，导致乳酸菌细 胞的功能性损伤，造成菌体死亡，而通过调节保护剂的 pH 值可以改变菌体的外部环境，使 之尽可能达到冻干前的 ΔpH 平衡，从而减少菌株由于冻干造成的损伤。

　　菌泥与保护剂平衡时间为 20 ～ 40 分钟，平衡时间太短不利于保护剂充分渗入菌 体内以提高抗冻能力，时间太长，保护剂对菌体的抗冻性保护能力会降低甚至产生副作用。

　　预冻时间的选择上，选择预冻 2.0 ～ 2.5 小时，预冻时间是影响整个冻干周期的重 要因素，在预冻过程中，由于菌体细胞内水分外渗，溶质浓度不断增高，而胞内冰晶的形成 均匀增加，因此，预冻时间过长，不仅会使得胞内冰晶刺伤菌体，还会造成能耗的浪费 ；而预 冻时间过短，则会造成产品没有完全冻结，抽真空时会引起起泡、收缩、喷瓶等不可逆变化 的发生，影响冻干存活率。

　　在本发明的优选实施例中，还进一步提高了上述因子的最佳参数，保护剂 pH 为 7.0，菌泥与保护剂平衡 30 分钟，-80℃预冻 2.0 小时，本发明进一步还优选采用磷酸缓冲液 配制保护剂，在这个参数下与 1.2 初始设置的常规植物乳杆菌常规冻干工艺对比，植物乳杆菌的冻干存活率高出 8 个百分点。