[00013496]一种新的制备肝实质细胞的方法

　　本发明涉及一种新的制备肝实质细胞的方法（专利号201010531420.4）。本发明通过在细胞中过表达若干个转录因子，将已经分化的体细胞在体外诱导成了具有功能的肝实质细胞。所述细胞可在肝脏中增殖，并重建肝脏功能。技术领域：本发明属于生物技术领域 ； 更具体地， 本发明涉及一种新的制备肝实质细胞及其制备方法。

　　背景技术：肝脏是人体最重要的器官之一， 调控着多种生理功能。肝脏本身具有很强的再生 能力， 但是在罹患各种肝脏疾病， 包括肝炎， 肝纤维化， 肝癌， 肝脏代谢疾病和肝功能衰竭 时， 肝脏逐渐失去再生能力， 从而导致其生理功能的下降， 最终危害着人们健康和生命。由 于饮食、 环境和遗传等因素的影响， 中国是世界上终末期肝病和急性肝衰竭发病人数最多 的国家。特别是目前中国有约一亿多的人口被乙型肝炎病毒感染， 由于乙型肝炎病毒感染 造成的终末期肝硬化、 肝癌和肝功能衰竭发病占据了世界第一。

　　对于终末期肝病以及急性肝衰竭治疗， 目前唯一有效手段是进行肝脏移植。但 是由于肝脏供体紧缺以及术后免疫系统对异体器官的排斥， 移植手术的发展受到了严重的 制约。最近基于肝细胞移植的技术受到广泛的关注。其中一个在临床上已经使用的方法 是将供体肝脏消化后得到的肝细胞移植入病人， 从而使得一个供体器官可以治疗若干个病 人。然而该方法仍旧依赖于捐献的供体器官， 并且不能改变移植后的免疫排斥。此外， 体外 培养的肝细胞还是一个非常好的药物肝脏代谢模型， 被制药公司大量使用在药物开发早期 检测代谢毒性实验中。 因此如何获得稳定而大量的肝细胞来源， 成为目前最迫切的需要。 随 着对干细胞研究的深入和新技术的突破， 利用干细胞或其他细胞来分化获得肝细胞被普遍 认为是未来的发展方向。从干细胞获得肝脏细胞主要有以下的一些方法 ：

　　方法一、 从人胚胎干细胞 (hES 细胞 ) 定向分化成肝细胞。最近的研究包括中国科 学家在内的工作已经表明， 在使用特定的培养基和细胞因子的条件下， hES 细胞可以被定向 的分化成具有肝细胞功能的细胞。并且利用这些分化的肝细胞， 在动物实验也已经验证这 些细胞在体内可以表现出功能。

　　方法二、 利用来源于脐带中分离的间充质干细胞来获得肝细胞。现有的证据表明 分离纯化的脐带间充质干细胞可以在体外分化成非常接近肝细胞的细胞， 并且脐带间充质 干细胞到注射肝脏内后可以分化表达许多肝细胞特异的功能蛋白。 中国的科学家也发现用 脐带间充质干细胞可以改善晚期肝硬化病人的肝功能。 这些研究工作都指出脐带间充质干 细胞极有可能是在体外大量获得肝细胞的另一个来源。

　　方法三、 上述的方法都受到了取材的限制， 特别是 ES 细胞的获得存在很大的伦理 道德问题。此外这些干细胞并非来自病人自身， 因而由其分化而来的肝细胞还是不能避免 移植后免疫排斥的问题。因此有人提出用人类 iPS 全能干细胞定向分化成为肝细胞。将病 人自身终末分化细胞诱导为 iPS 全能干细胞， 再定向分化 iPS 全能干细胞为有肝细胞功能 的细胞。目前中国和美国的科学家已经报道成功的把人类 iPS 细胞定向分化成了具有肝脏 功能的细胞。