[00011011]一种基于单克隆抗体的检测食品中沙门氏菌属的特异性双抗体夹心法

　　本发明涉及了一种定量检测食品中沙门氏菌属的双抗体夹心法（专利号201510183851.9），属于免疫分析领域。

　　本发明用高碘酸钠法将光滑型鼠伤寒沙门氏菌LPS偶联牛血清白蛋白免疫7周龄的BALB/c小鼠，经免疫、融合、筛选得12株特异性识别沙门氏菌属的LPS单克隆抗体。12株抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP并以甲型副伤寒沙门氏菌菌体进行两两配对。以8G3作为包被抗体，8G3-HRP作为检测抗体，建立检测沙门氏菌属特异性双抗体夹心法，检测甲型副伤寒沙门氏菌LOD为10^6CFU/mL。本方法与沙门氏菌属内的菌均有交叉反应，而与E.coli、E.coli?O157:H7、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌无交叉反应，为食品中沙门氏菌属的检测提供了全面、可靠、快速高效的分析手段。

　　本发明方法的检测分析原理是：酶标板上包被了包被抗体8G3，该抗体可特异性捕获沙门氏菌属内的沙门氏菌；洗板3次，洗去未结合的抗体，加入封闭液220μL封闭板孔上多余结合位点；洗板3次，加入样品和对照，37℃孵育1h；洗板3次，加入检测抗体8G3-HRP，37℃孵育1h；洗板4次，加入显色液显色10min。如果样品有足够的沙门氏菌，那么沙门氏菌被包被抗体捕获并与检测抗体8G3-HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值（P/N≥2.1），并被判定为阳性；如果样品沙门氏菌浓度太低（P/N＜2.1）那么样品不被捕获或者捕获数量太小不足以引起足够的信号，被判定为阴性。[0013]抗体8G3，即细胞株O，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo.9804。

　　本发明提供的沙门氏菌双抗体夹心检测方法基于沙门氏菌属特异性的LPS单克隆抗体，建立的夹心法可以在菌属水平上检测沙门氏菌。同时稳定性好、成本低，能同时检测大量样品，适合食品行业大规模、高通量、快速、灵敏的检测要求，具有推广和应用价值。[0016]生物材料样品保藏：单克隆细胞株O，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，筒称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCCNo.9804，保藏日期2014年10月15日。